ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К МЕТОДУ ИСПЫТАНИЯ НА ИММУНОГЕННОСТЬ В НАЦИОНАЛЬНЫХ ИНСТИТУТАХ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ США

Стандартный вирус для испытания иммунитета

Стандартный разрешающий вирус (CVS) доставляется в лаборатории США периодически (обычно один раз в год) . Это обеспечивает однородность вируса и позволяет оценивать различные партии вакцины, выпускаемые в одной лаборатории, а также вакцины разных лабораторий. Лаборатории должны точно следовать описанной методике.

Рабочая суспензия CYS

CVS доставляется в лаборатории США в виде 20% суспензии мышиного мозга; суспензионной средой служит дистиллированная вода, содержащая 2% лошадиной сыворотки. Суспензию хранят в контейнере с сухим льдом; ее можно применять лишь при условии, что она транспортировалась в замороженном состоянии. Если есть опасность, что при пересылке суспензия может оттаять, то лучше рассылать ее в лиофилизированном виде. Ампулы высушенного препарата содержат по 0,5 мл 20% суспензии мышиного мозга, идентичной замороженному препарату. Содержимое ампулы с замороженным препаратом необходимо быстро оттаять под струей холодной воды и затем развести 2% лошадиной сывороткой в отношении 1: 2. В результате получают 10% суспензию, которую центрифугируют в течение 5 минут со скоростью 1000—2000 g. Надосадочную жидкость разводят до 10 и в качестве дозы для введения используют 0,03 мл этого разведения.

Заражают одновременно столько мышей, сколько нужно для получения такого количества рабочей суспензии CVS, которое необходимо на 1 год (из мозга одной мыши можно приготовить в среднем 1,5 мл 20% суспензии) Чтобы обеспечить высокий титр рабочей суспензии, приготавливаемой из лиофилизированного вируса, лучше сделать два пассажа на мышах и для приготовления рабочей суспензии CVS воспользоваться вторым пассажем. Паралич развивается у мышей на 6—10-й день. Когда раз-вивается полный паралич, но мышь еще жива, извлекают мозг и тотчас замораживают его в контейнере с сухим льдом. Мозг складывают в общий контейнер и, набрав нужное количество, оттаивают, взвешивают и гомогенизируют; во время гомогенизации постепенно добавляют 2% лошадиную сыворотку в количестве, необходимом для получения 20% суспензии. Суспензия получает порядковый номер; не подвергая центрифугированию, ее разливают по ампулам. Ампулы запаивают на пламени, быстро замораживают и хранят при температуре сухого льда (около 70°).

Все этапы работы по приготовлению рабочей суспензии CVS должны выполняться быстро, Чтобы сохранить по возможности большую часть вируса живым. Прежде чем использовать суспензию для испытания иммунитета, необходимо определить LD⁵⁰ данной серии на 6-недельных мышах. Серия считается пригодной, если ее титр LD⁵⁰ находятся в пределах 10:60—10:80 включительно. Максимально допустимые колебания титра одной и той же серии разрешающего вируса не должны выходить за пределы одного 10-кратного разведения. Хранить суспензию можно до тех пор, пока она сохраняет полную активность, о чем судят с помощью титрования на мышах. Это необходимо для того, чтобы обеспечить однородность рабочей суспензии CVS во всех лабораториях, выпускающих антирабическую вакцину.